pET-N-GST-Thrombin-C-His是一种用于表达N端含GST标签(Glutathione S-transferase tag,GST tag)或C端含His标签(His tag)的重组蛋白的原核表达质粒，也可用于表达N端含GST标签并且同时C端含His标签的重组蛋白。GST和His双标签有利于通过GST柱和镍柱两种方法来纯化目的蛋白，使目的蛋白的纯度更高。本质粒N端GST标签后有Thrombin酶切位点，可通过Thrombin蛋白酶切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列，后面有一个His标签的编码序列，后者含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据读码框插入不含终止密码子的目的基因就可以表达N端含有GST标签并且C端含有His标签的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加终止密码子，这样就可以表达仅在N端含有GST标签的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白。
本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS，对应的核酸序列为CTGGTTCCGCGTGGATCC，因此在目的蛋白纯化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。
通常可以采用如GST标签蛋白纯化树脂(货号：YT958)、GST标签蛋白纯化试剂盒(货号：YT959)、His标签蛋白纯化树脂(货号：YT616)或His标签蛋白纯化试剂盒(货号：YT046)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体(YT784/YT722)和His-tag抗体(YT789)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
| 组分 | 1μg | 100μg |
| pET-N-GST-Thrombin-C-His | 1μg | 100μg |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃
| Feature Nucleotide | Position |
| f1 origin | 12-467 |
| Kanamycin resistance ORF | 563-1645 |
| PBR 322 origin | 2084 |
| LacI coding sequence | 3518-4597 |
| T7 promoter | 4988-5004 |
| GST tag coding sequence | 5076-5732 |
| Thrombin recognition site sequence | 5739-5756 |
| Multiple cloning site(BamHI-XhoI) | 5751-5798 |
| His tag coding sequence | 5799-5816 |
| T7 Terminator | 5884-5930 |
- pET-N-GST-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括：
AatII Acc65I AflII AgeI AhdI AleI AscI AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BmtI BsaI BseRI BsiWI BspMI BsrGI Bsu36I CspCI EagI Eco53kI FseI KpnI MfeI NcoI NheI NotI PacI PmeI PmlI PspXI RsrII SacI SacII SbfI SexAI SfiI SnaBI SpeI SrfI StuI ZraI - pET-N-GST-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括：
DraIII CAC,NNN`GTG 242 BstEII G`GTNAC,C 4060 PsiI TTA|TAA 370 MluI A`CGCG,T 4242 PvuI CG,AT`CG 943 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563 AsiSI GCG,AT`CGC 943 SphI G,CATG`C 4771 SmaI CCC|GGG 1067 SgrAI CR`CCGG,YG 4923 XmaI C`CCGG,G 1067 XbaI T`CTAG,A 5034 TspMI C`CCGG,G 1069 NdeI CA`TA,TG 5074 NruI TCG|CGA 1286 MscI TGG|CCA 5286 AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1597 BstBI TT`CG,AA 5476 AlwNI CAG,NNN`CTG 1729 SwaI ATTT|AAAT 5506 BssSI C`ACGA,G 1968 ScaI AGT|ACT 5652 BstZ17I GTA|TAC 2374 BamHI G`GATC,C 5751 Tth111I GACN`N,NGTC 2399 HindIII A`AGCT,T 5757 PflFI GACN`N,NGTC 2399 PstI C,TGCA`G 5763 PpuMI RG`GWC,CY 3136 EcoRI G`AATT,C 5769 FspI TGC|GCA 3164 EcoRV GAT|ATC 5777 BglI GCCN,NNN`NGGC 3182 SalI G`TCGA,C 5781 PshAI GACNN|NNGTC 3401 BglII A`GATC,T 5787 HpaI GTT|AAC 3740 XhoI C`TCGA,G 5793 BssHII G`CGCG,C 3831 PaeR7I C`TCGA,G 5793 ApaI G,GGCC`C 4035 BlpI GC`TNA,GC 5872 PspOMI G`GGCC,C 4035 StyI C`CWWG,G 5894 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041
pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
pET-F primer (5619-5638):5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer (5869-5888):5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
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- 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
- 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1mL。可以直接用于酶切或者转染细胞。
- pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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